ABSTRACT The diagnosis of bovine tuberculosis (TB) by molecular techniques has been broadly studied. These methods allow accelerating the diagnosis, in addition to presenting high specificity and sensitivity in the identification of the pathogen, critical characteristic for public health, especially when it comes to the direct diagnosis of the biologic samples, which has been little explored. This paper has evaluated a multiplex polymerase chain reaction (mPCR) as a tool to diagnose TB, which was performed directly on the granulomatous material of suspicious lesions collected in a cold chamber under state inspection in the state of Bahia, Brazil. Of the 74 samples evaluated, 14.86% were positive, with 10.81% positive for mPCR and culture, 4.05% negative for cultivation and positive for mPCR. The correlation between the cultivation and the mPCR presented agreeance higher than 61.54% of the cases. The results have indicated that the protocol proved itself effective, fast and very promising in the surveillance in slaughterhouses for the diagnosis of tuberculosis directly from the granuloma.

RESUMO: O Mycobacterium bovis é o responsável pela tuberculose bovina e bubalina, doença zoonótica importante e com distribuição global. O conhecimento da distribuição e a identificação precisa dessa enfermidade, incluindo diagnósticos mais avançados como o spoligotyping, permite escolher as melhores estratégias de combate ao avanço da doença. O presente trabalho objetivou investigar a presença de micobactérias, genotipar suas estirpes e avaliar a distribuição espacial dos casos de tuberculose a partir de lesões sugestivas nas carcaças de bovinos e bubalinos inspecionadas em frigoríficos sob regime de inspeção oficial no estado da Bahia. Foram investigados 453.417 animais dentre os quais 31 (0,007%) foram suspeitos de doença e provenientes de 17 municípios. Após o crescimento em meio de cultura, 95% foram categorizados como bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR). Todos os isolados foram submetidos à spoligotyping e 95% foram confirmados M. bovis (SB0120, SB0121, SB0852, SB0828, SB0295, SB0881, SB1648, SB6119, SB0140, SB1055). A cepa SB0120 foi a mais prevalente e este perfil vem sendo descrito na literatura com casos de tuberculose humana por M. bovis ressaltando o potencial zoonótico deste perfil. Este estudo também identificou cepas nunca relatadas no estado da Bahia, destacando um padrão distinto de outras partes do Brasil, além da existência de infecções mistas. Permitiu ainda relatar linhagens nunca antes descritas no estado com destaque para um padrão novo no Brasil (SB6119 e SB0852 respectivamente). Um perfil inédito identificado foi identificado e inserido no banco de dados internacional (Mbovis.org), nomeado SB2715.

ABSTRACT: Mycobacterium bovis is responsible for bovine and buffalo tuberculosis, an important zoonotic disease with global distribution. The knowledge of the distribution and the precise identification of this disease, including advanced diagnoses such as spoligotyping, allows choosing the best strategies to fight the disease’s progress. The present work aimed to investigate mycobacteria’s presence, genotype their strains, and evaluate tuberculosis cases’ spatial distribution from suggestive lesions in carcasses of bovine and buffalo inspected in slaughterhouses under an official inspection regime in the state of Bahia, Brazil. The study investigated 453,417 animals. Among these, 31 (0.007%) from 17 municipalities were suspected of tuberculosis. Among the culture medium growth, 95% of these were categorized as alcohol-acid resistant bacilli (BAAR). All isolates were subjected to spoligotyping and 95% were confirmed as M. bovis (SB0120, SB0121, SB0852, SB0828, SB0295, SB0881, SB1648, SB6119, SB0140, SB1055). The strain SB0120 was the most prevalent, and this profile has been described in cases of human tuberculosis by M. bovis, highlighting the zoonotic potential of this profile. This study also identified strains never reported in Bahia, highlighting a distinctive pattern from other parts of Brazil, besides mixed infections. Besides, to identify strains never before described in the state, highlighting a distinctive pattern in Brazil (SB6119 and SB0852, respectively). An unpublished profile was identified and inserted in the international database (Mbovis.org), named SB2715.

RESUMO: A tuberculose bovina (TB) é uma zoonose causada pelo Mycobacterium bovis, o qual induz ao desenvolvimento de lesões nodulares e granulomatosas em vários tecidos do animal. O reconhecimento dessas lesões macroscópicas sugestivas durante a inspeção sanitária post mortem em matadouros fornece um diagnóstico presuntivo, sendo necessário a utilização de testes complementares para confirmação da doença. O objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência da TB em animais abatidos em matadouros-frigoríficos no estado do Ceará através da utilização de métodos bacteriológicos e moleculares. Para tanto, foram analisadas lesões sugestivas de TB em carcaças condenadas pelo Serviço de Inspeção Estadual (SIE). As amostras foram submetidas à análise microbiológica, utilizando meios de cultivo e de coloração específicos, seguida pela técnica molecular spoligotyping para identificação e tipificação genética da micobactéria. Verificou-se a ocorrência de lesões sugestivas de TB em carcaças bovinas (0,071%) oriundas de diferentes municípios do estado do Ceará. Essas lesões estavam localizadas principalmente no pulmão (95,12%), linfonodos (58,53%) e fígado (36,58%). O cultivo microbiológico obteve isolamento bacteriano (17,94%), com o crescimento de colônias apresentando características morfológicas e tintoriais pertencentes ao gênero Mycobacterium spp. A análise do polimorfismo genético identificou a presença de M. bovis em todos os isolados, que foram discriminados em seis espoligotipos (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870 e SB0852), descritos no Brasil e em diversas áreas do mundo, exceto os perfis SB1064 e SB0852 que foram descritos pela primeira vez no país. Os resultados obtidos demonstram que a associação dos métodos diagnósticos utilizados foram a base do primeiro estudo de identificação das micobactérias encontradas no estado do Ceará, o que pode contribuir para a criação de um banco de dados para o estudo epidemiológico da TB no estado.

ABSTRACT: Bovine tuberculosis (BTB) is a zoonosis caused by the bacterium Mycobacterium bovis, which induces the development of nodular and granulomatous lesions in various animal tissues. The recognition of these suggestive gross lesions during postmortem sanitary inspection in slaughterhouses provides a presumptive diagnosis, which requires the use of complementary tests to confirm the disease. This study aimed to verify the occurrence of BTB in cattle slaughtered in slaughterhouses in the state of Ceará, Brazil, using bacteriological and molecular methods. To this end, suggestive lesions were analyzed on carcasses condemned by the “Serviço de Inspeção Estadual” (SIE). The samples were submitted to microbiological analysis using culture media and specific staining followed by spoligotyping molecular technique for identification and genotyping of the mycobacteria. Occurrence of lesions suggestive of BTB was verified in bovine carcasses (0.071%) from different municipalities of the state. These lesions were located mainly in the lung (95.12%), lymph nodes (58.53%), and liver (36.58%). Microbiological culture showed bacterial isolation (17.94%), with the growth of colonies showing morphological and tannic characteristics belonging to genus Mycobacterium spp. Genetic polymorphism analysis identified M. bovis in all isolates, which were discriminated into six spoligotypes (SB0121, SB0295, SB1064, SB0120, SB0870, and SB0852). These profiles have been described in Brazil and several areas of the world, except for profiles SB1064 and SB0852, which were described in the country for the first time. The results show that the association of the diagnostic methods used was the basis for the first study on identification of mycobacteria found in the state, which may provide a database for the epidemiological study of BTB in the state of Ceará.